Pekala çocuklar! Sizinle biraz bilgi paylaşma zamanı. Psilosin için yaptığım bir sentezi fotoğraflarla birlikte anlatacağım. Üretilen psilosini kullandım ve basit bir yapışkan yama geliştirdim. Yamadaki psilosinin geçirgenliğini test etmek için, bir araya getirdiğim bir difüzyon aparatı kullandık. Bu düzenek, 400 um kalınlığında (bir karın germe ameliyatı merkezinden bağışlanan) 1 cm^2 taze insan derisi parçasının üzerine yerleştirilmiş 1 cm^2'lik bir yama ile birkaç membran içermektedir. Derinin altında pH 7.4 ve vücut sıcaklığında sabit bir su akışı vardır. Difüzyon aparatı saatte 1 mL fraksiyon toplayabilmekte ve bu fraksiyon LC-MS ile analiz edilmektedir. 1mL'lik şişedeki psilosin miktarı akıyı (mg/saat/cm^2) verecektir. Bu, cm^2'lik bir yama boyutu ile saatte ne kadar psilosin geçtiğini belirler.
Psilosin oldukça kararsız olduğu için bu konu daha da derinleşmektedir. Aşağıdaki yayın, Oksidatif Psilosin Dimerizasyonu ile Üretilen Kromoforların Yapı Aydınlatması ve Spektroskopik Analizi, konuyu ele almaktadır. Dimer oluştuğunda, HPLC analizi ve ATR-FTIR yoluyla tespit edilemez, ki bu gariptir. Bu durum araştırma gruplarına psilosin saflığı konusunda yanlış pozitif sonuçlar vermektedir. Psilosini bantta stabilize etmenin bir yolunu buldum.
Her neyse, başlayalım! Kimya mühendisi olan ortağımın yardımıyla her adımı kendim yaptım. Bu, sadece araştırma için değil, aynı zamanda Üretim için de program1 ve 3 DEA lisansına sahip olduğum zamanlardı.
Bölüm I (Psilosin Sentezi)
adım 1: 3-[2-(Dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il Asetat sentezi
1a. 2000 mL'lik, dört boyunlu, yuvarlak tabanlı bir balon, bir üstten karıştırıcı, J-Kem sıcaklık kontrolörü, 250 mL'lik bir damlatma hunisi ve içinden pozitif basınçlı kuru N2'nin sokulduğu kauçuk septum ile donatılmıştır. Septum çıkarıldı ve balon eşit miktarda 1H-indol-4-il asetat (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv) ile dolduruldu.
nd anhyd Et2O (700 mL). Balon septum ile tekrar kapatıldı ve N2 ile yıkandı. Süspansiyon 10 dakika karıştırıldı ve ardından
buzlu su banyosunda 30 dakika boyunca 0 °C'ye soğutulmuştur.
1b. Damlatma hunisi Et2O (60 mL) içinde bir oksalil klorür (37,1 mL, 428 mmol, 1,5 equiv) çözeltisi ile dolduruldu. Oksalil klorür çözeltisi, dimer ve diğer olası yan ürün oluşumunu en aza indirmek için sıcaklığı 5 °C'de veya altında tutmaya yetecek bir hızda damla damla ilave edildi. Ekleme ilerledikçe sarı bir 10 bulamacı oluştu ve ekleme tamamlandığında karışım 4 saat boyunca karıştırıldı.
1c. Bu sürenin sonunda heptan (400 mL) ilave edildi ve karışım 0 °C'de 30 dakika karıştırıldı. Elde edilen sarı katı hızla süzüldü ve bir sonraki adımda hızla kullanılan heptan (2 × 300 mL) ile art arda durulandı. . THF (175 mL) içinde 2.0 M dimetilamin çözeltisi, yan reaksiyonları en aza indirmek için sıcaklığı 5 °C'nin altında tutmaya yetecek bir hızda damla damla ilave edildi. Sonra
ilavesi tamamlandıktan sonra, THF (100 mL) içindeki piridin (46 mL) damla damla ilave edildi ve karışım 60 dakika boyunca iyice karıştırıldı. Heptan (600 mL) ilave edildi ve balon içeriği bir Büchner hunisi aracılığıyla emilerek süzüldü. Süzülen kalıntı yuvarlak tabanlı bir balona aktarıldı ve deiyonize H2O (1000 mL) eklendi, 30 dakika karıştırıldı ve Büchner hunisi ile süzüldü. Kirli beyaz katı EtOAc (600 mL) ve heptan (400 mL) içinde 40 dakika boyunca sırayla tritu-rated edildi. Bulamaç Büchner hunisi ile süzüldü ve katı, açık sarı bir katı olarak 6'yı elde etmek için bir gece boyunca 40 °C'de fırında kurutuldu; verim: 66,1 g (%81); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR, 3-[2-(Dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il Asetat sentezini doğrulamıştır. Bu bileşik birkaç ay boyunca 4C'de saklanabilir!
Adım 2: Psilosin Sentezi
Adım 2A: 2000 mL'lik, dört boyunlu, yuvarlak tabanlı bir balon, bir üstten karıştırıcı, J-Kem sıcaklık kontrolörü, bir
250 mL damlatma hunisi ve içinden pozitif basınçlı kuru N2 geçirilen kauçuk septum. Septum çıkarıldı ve
balonuna sırayla 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il asetat (6; 31,5 g, 115 mmol) ve 2-CH3-THF (1000
mL). Flask 0 °C'de bir buz banyosuna daldırıldı ve 2-CH3-THF (140 mL, 322 mmol) içinde 2,3 M LiAlH4 çözeltisi eklendi.
250 mL'lik damlatma hunisi. Damlatma hunisi ilave 2-CH3-THF (20 mL) ile durulandı. LiAlH4 çözeltisi damla damla ilave edildi
sıcaklığı 20 °C'nin altında tutacak bir hızda ilave edilmiştir. İlaveden sonra buzlu su banyosu çıkarıldı ve karışım 30 dakika karıştırıldı.
Açık sarı renkli çözelti bir ısıtma mantosu ile reflü (80 °C) derecesine kadar ısıtıldı ve 3 saat sonra fildişi rengini aldı.
yuvarlak tabanlı şişenin kenarlarında sarı katılar gözlendi
Adım 2C. Isıtma mantosu çıkarıldı ve şişenin 50 °C'ye kadar soğumasına izin verildi. Şişe tekrar
20 °C'ye kadar soğutuldu. Reaksiyon, 3 damla aq 1 M NaOH ve 3 damla deiyonize H2O'nun sırayla eklenmesiyle söndürüldü. Karışım
THF (500 mL) ile seyreltildi ve 20 dakika karıştırıldı. Karışım Büchner hunisi ile süzüldü ve süzüntü N2 altında tutuldu.
Filtre keki 200 mL [CH2Cl2 içinde %10'luk (MeOH içinde %7'lik amonyak) çözeltisi] ve THF (500 mL) ile hızlı bir şekilde yeniden karıştırıldı. Süzüntüler
daha sonra birleştirildi ve yeşil bir katı elde etmek üzere konsantre edildi. Katı madde 1:1 EtOAc/heptan (50 mL) ile tritüre edildi, ardından
Büchner hunisi. Koyu yeşil katı, koyu yeşil bir katı olarak kuru psilosin (7) elde etmek için bir gece boyunca 40 °C'de fırında kurutuldu; verim: 20,7
g (%91); mp 167-169 °C.
Psilosin sentezlenmiştir.
Bölüm II: Transdermal Psilosin Yaması Geliştirilmesi ve İn-Vitro Çalışma (DİKKAT: TAZE İNSAN DİŞİ GÖRECEKSİNİZ, KABA
Daha sonra psilosini tescilli bir akrilat polimer karışımında (heptan içinde) çözüyorum, ardından çözeltiyi bir ayırma hattına döküyorum ve yapışkan tabakayı 100 um'ye getirmek için bir döküm bıçağı kullanıyorum. Kuruduktan sonra destek katmanını uyguluyorum ve 1 cm^2'lik bir yama açıyorum. Bu yama in vitro çalışma için kullanılıyor.
Aşağıdaki fotoğraf difüzyon aparatının bir görüntüsüdür (yama cildin üstünde ve altından su akıyor)
Umarım beğenmişsinizdir!
Psilosin oldukça kararsız olduğu için bu konu daha da derinleşmektedir. Aşağıdaki yayın, Oksidatif Psilosin Dimerizasyonu ile Üretilen Kromoforların Yapı Aydınlatması ve Spektroskopik Analizi, konuyu ele almaktadır. Dimer oluştuğunda, HPLC analizi ve ATR-FTIR yoluyla tespit edilemez, ki bu gariptir. Bu durum araştırma gruplarına psilosin saflığı konusunda yanlış pozitif sonuçlar vermektedir. Psilosini bantta stabilize etmenin bir yolunu buldum.
Her neyse, başlayalım! Kimya mühendisi olan ortağımın yardımıyla her adımı kendim yaptım. Bu, sadece araştırma için değil, aynı zamanda Üretim için de program1 ve 3 DEA lisansına sahip olduğum zamanlardı.
Bölüm I (Psilosin Sentezi)
adım 1: 3-[2-(Dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il Asetat sentezi
1a. 2000 mL'lik, dört boyunlu, yuvarlak tabanlı bir balon, bir üstten karıştırıcı, J-Kem sıcaklık kontrolörü, 250 mL'lik bir damlatma hunisi ve içinden pozitif basınçlı kuru N2'nin sokulduğu kauçuk septum ile donatılmıştır. Septum çıkarıldı ve balon eşit miktarda 1H-indol-4-il asetat (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv) ile dolduruldu.
nd anhyd Et2O (700 mL). Balon septum ile tekrar kapatıldı ve N2 ile yıkandı. Süspansiyon 10 dakika karıştırıldı ve ardından
buzlu su banyosunda 30 dakika boyunca 0 °C'ye soğutulmuştur.
1b. Damlatma hunisi Et2O (60 mL) içinde bir oksalil klorür (37,1 mL, 428 mmol, 1,5 equiv) çözeltisi ile dolduruldu. Oksalil klorür çözeltisi, dimer ve diğer olası yan ürün oluşumunu en aza indirmek için sıcaklığı 5 °C'de veya altında tutmaya yetecek bir hızda damla damla ilave edildi. Ekleme ilerledikçe sarı bir 10 bulamacı oluştu ve ekleme tamamlandığında karışım 4 saat boyunca karıştırıldı.
1c. Bu sürenin sonunda heptan (400 mL) ilave edildi ve karışım 0 °C'de 30 dakika karıştırıldı. Elde edilen sarı katı hızla süzüldü ve bir sonraki adımda hızla kullanılan heptan (2 × 300 mL) ile art arda durulandı. . THF (175 mL) içinde 2.0 M dimetilamin çözeltisi, yan reaksiyonları en aza indirmek için sıcaklığı 5 °C'nin altında tutmaya yetecek bir hızda damla damla ilave edildi. Sonra
ilavesi tamamlandıktan sonra, THF (100 mL) içindeki piridin (46 mL) damla damla ilave edildi ve karışım 60 dakika boyunca iyice karıştırıldı. Heptan (600 mL) ilave edildi ve balon içeriği bir Büchner hunisi aracılığıyla emilerek süzüldü. Süzülen kalıntı yuvarlak tabanlı bir balona aktarıldı ve deiyonize H2O (1000 mL) eklendi, 30 dakika karıştırıldı ve Büchner hunisi ile süzüldü. Kirli beyaz katı EtOAc (600 mL) ve heptan (400 mL) içinde 40 dakika boyunca sırayla tritu-rated edildi. Bulamaç Büchner hunisi ile süzüldü ve katı, açık sarı bir katı olarak 6'yı elde etmek için bir gece boyunca 40 °C'de fırında kurutuldu; verim: 66,1 g (%81); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR, 3-[2-(Dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il Asetat sentezini doğrulamıştır. Bu bileşik birkaç ay boyunca 4C'de saklanabilir!
Adım 2: Psilosin Sentezi
Adım 2A: 2000 mL'lik, dört boyunlu, yuvarlak tabanlı bir balon, bir üstten karıştırıcı, J-Kem sıcaklık kontrolörü, bir
250 mL damlatma hunisi ve içinden pozitif basınçlı kuru N2 geçirilen kauçuk septum. Septum çıkarıldı ve
balonuna sırayla 3-[2-(dimetilamino)-2-oksoasetil]-1H-indol-4-il asetat (6; 31,5 g, 115 mmol) ve 2-CH3-THF (1000
mL). Flask 0 °C'de bir buz banyosuna daldırıldı ve 2-CH3-THF (140 mL, 322 mmol) içinde 2,3 M LiAlH4 çözeltisi eklendi.
250 mL'lik damlatma hunisi. Damlatma hunisi ilave 2-CH3-THF (20 mL) ile durulandı. LiAlH4 çözeltisi damla damla ilave edildi
sıcaklığı 20 °C'nin altında tutacak bir hızda ilave edilmiştir. İlaveden sonra buzlu su banyosu çıkarıldı ve karışım 30 dakika karıştırıldı.
Açık sarı renkli çözelti bir ısıtma mantosu ile reflü (80 °C) derecesine kadar ısıtıldı ve 3 saat sonra fildişi rengini aldı.
yuvarlak tabanlı şişenin kenarlarında sarı katılar gözlendi
Adım 2C. Isıtma mantosu çıkarıldı ve şişenin 50 °C'ye kadar soğumasına izin verildi. Şişe tekrar
20 °C'ye kadar soğutuldu. Reaksiyon, 3 damla aq 1 M NaOH ve 3 damla deiyonize H2O'nun sırayla eklenmesiyle söndürüldü. Karışım
THF (500 mL) ile seyreltildi ve 20 dakika karıştırıldı. Karışım Büchner hunisi ile süzüldü ve süzüntü N2 altında tutuldu.
Filtre keki 200 mL [CH2Cl2 içinde %10'luk (MeOH içinde %7'lik amonyak) çözeltisi] ve THF (500 mL) ile hızlı bir şekilde yeniden karıştırıldı. Süzüntüler
daha sonra birleştirildi ve yeşil bir katı elde etmek üzere konsantre edildi. Katı madde 1:1 EtOAc/heptan (50 mL) ile tritüre edildi, ardından
Büchner hunisi. Koyu yeşil katı, koyu yeşil bir katı olarak kuru psilosin (7) elde etmek için bir gece boyunca 40 °C'de fırında kurutuldu; verim: 20,7
g (%91); mp 167-169 °C.
Psilosin sentezlenmiştir.
Bölüm II: Transdermal Psilosin Yaması Geliştirilmesi ve İn-Vitro Çalışma (DİKKAT: TAZE İNSAN DİŞİ GÖRECEKSİNİZ, KABA
Daha sonra psilosini tescilli bir akrilat polimer karışımında (heptan içinde) çözüyorum, ardından çözeltiyi bir ayırma hattına döküyorum ve yapışkan tabakayı 100 um'ye getirmek için bir döküm bıçağı kullanıyorum. Kuruduktan sonra destek katmanını uyguluyorum ve 1 cm^2'lik bir yama açıyorum. Bu yama in vitro çalışma için kullanılıyor.
Aşağıdaki fotoğraf difüzyon aparatının bir görüntüsüdür (yama cildin üstünde ve altından su akıyor)
Umarım beğenmişsinizdir!
