V poriadku, chlapci! Je čas podeliť sa s vami o niektoré vedomosti. Opíšem syntézu psilocínu, ktorú som vykonal, spolu s fotografiami. Vyrobený psilocín som použil a vyvinul jednoduchú lepiacu náplasť. Na testovanie prenikania psilocínu do náplasti sme použili difúzny prístroj, ktorý som zostavil. Zahŕňa niekoľko membrán, pričom náplasť s veľkosťou 1 cm^2 sa položí na 1 cm^2 čerstvej ľudskej kože s hrúbkou 400 um (darovaná z chirurgického centra na úpravu brucha). Pod kožou je konštantný tok vody s pH 7,4 a telesnou teplotou. Difúzny prístroj je schopný zozbierať 1 ml frakcie za hodinu, ktorá sa potom analyzuje pomocou LC-MS. Množstvo psilocínu v 1 ml fľaštičke poskytne tok (mg/hod/cm^2). To určuje, koľko psilocínu prejde za hodinu pri veľkosti náplasti cm^2.
Toto sa prehlbuje, pretože psilocín je veľmi nestabilný. v nasledujúcej publikácii Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization (Objasnenie štruktúry a spektroskopická analýza chromofórov produkovaných oxidačnou dimerizáciou psilocínu) sa preberá táto problematika. Keď sa vytvorí dimér, je nedetekovateľný pomocou analýzy HPLC a ATR-FTIR, čo je zvláštne. Výskumné skupiny tak získavajú falošne pozitívne údaje o čistote psilocínu. Našiel som spôsob, ako stabilizovať psilocín v náplasti.
Každopádne, môžeme začať! Každý krok som urobil sám s pomocou môjho partnera, ktorý je chemický inžinier. Bolo to ešte v čase, keď som mal licenciu DEA podľa zoznamu1 a 3 nielen na výskum, ale aj na výrobu.
Časť I (syntéza psilocínu)
krok 1: syntéza 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetylu]-1H-indol-4-yl acetátu
1a. Štvorhrdlová banka s okrúhlym dnom s objemom 2000 ml bola vybavená horným miešadlom, regulátorom teploty J-Kem, 250 ml kvapkacím lievikom a gumovou prepážkou, cez ktorú bol zavedený pretlak suchého N2. Prepážka sa odstránila a banka sa rovnomerne naplnila 1H-indol-4-yl-acetátom (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv)
a anhyd Et2O (700 ml). Banka sa znovu uzavrela septom a preplachovala sa N2. Suspenzia sa miešala 10 min a potom sa
ochladzovaná na 0 °C v ľadovom vodnom kúpeli počas 30 min.
1b. Do kvapkacieho lievika sa pridal roztok oxalylchloridu (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviv) v Et2O (60 ml). Roztok oxalylchloridu sa pridával po kvapkách rýchlosťou dostatočnou na udržanie teploty na úrovni 5 °C alebo nižšej, aby sa minimalizovala tvorba diméru a iných možných vedľajších produktov. Pri postupujúcom pridávaní sa vytvorila žltá suspenzia 10 a po dokončení pridávania sa zmes miešala 4 h.
1c. Po tomto čase sa pridal heptán (400 ml) a zmes sa miešala 30 min pri 0 °C. Získaná žltá tuhá látka sa rýchlo prefiltrovala a postupne prepláchla heptánom (2 × 300 ml), ktorý sa rýchlo použil v ďalšom kroku. . 2,0 M roztok dimetylamínu v THF (175 ml) sa pridával po kvapkách rýchlosťou dostatočnou na udržanie teploty pod 5 °C, aby sa minimalizovali vedľajšie reakcie. Po
(46 ml) v THF (100 ml) sa po kvapkách pridával pyridín a zmes sa dobre miešala 60 minút. Pridal sa heptán (600 ml) a obsah banky sa prefiltroval cez Büchnerov lievik. Prefiltrovaný zvyšok sa preniesol do banky s okrúhlym dnom a pridala sa deionizovaná H2O (1000 ml), miešalo sa 30 min a filtrovalo sa cez Büchnerov lievik. Biela pevná látka sa triturovala postupne 40 min v EtOAc (600 ml) a heptáne (400 ml). Suspenzia sa prefiltrovala cez Büchnerov lievik a pevná látka sa sušila v sušičke pri 40 °C cez noc, čím sa získal 6 ako svetložltá pevná látka; výťažok: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR potvrdila syntézu syntézy 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu. Túto zlúčeninu možno skladovať pri teplote 4C niekoľko mesiacov!
Krok 2: Syntéza psilocínu
Krok 2A: 2000 ml štvorhrdlová banka s okrúhlym dnom bola vybavená horným miešadlom, regulátorom teploty J-Kem
250 ml kvapkacím lievikom a gumovou prepážkou, cez ktorú bol zavedený pretlak suchého N2. Prepážka sa odstránila a
do banky sa postupne pridával 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetát (6; 31,5 g, 115 mmol) a 2-CH3-THF (1000
ml). Banka sa ponorila do ľadovej kúpele pri teplote 0 °C a roztok 2,3 M LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 ml, 322 mmol) sa pridal cez
250 ml kvapkacím lievikom. Kvapkový lievik sa prepláchol ďalším 2-CH3-THF (20 ml). Roztok LiAlH4 sa pridal po kvapkách
takou rýchlosťou, aby sa udržala teplota pod 20 °C. Po pridaní sa odstránil ľadový vodný kúpeľ a zmes sa miešala 30 min.
Svetložltý roztok sa zahrieval na reflux (80 °C) s ohrievacím plášťom a po 3 h sa sfarbil na slonovinovú farbu.
na stenách banky s okrúhlym dnom sa pozorovalo hromadenie žltých pevných látok
Krok 2C. Vykurovací plášť sa odstránil a banka sa nechala vychladnúť na 50 °C. Banka sa opäť
ochladená na 20 °C. Reakcia sa uhasila postupným pridaním 3 kvapiek 1 M aq NaOH a 3 kvapiek deionizovanej H2O. Zmes
sa zriedila THF (500 ml) a miešala 20 min. Zmes sa prefiltrovala cez Büchnerov lievik a filtrát sa uchovával pod N2.
Filtračný koláč sa rýchlo znovu premiešal s 200 ml [10 % roztoku (7 % amoniaku v MeOH) v CH2Cl2] a THF (500 ml). Filtráty
sa potom spojili a skoncentrovali, čím sa získala zelená tuhá látka. Pevná látka sa triturovala v pomere 1:1 EtOAc/heptán (50 ml), potom sa filtrovala cez
Büchnerovým lievikom. Tmavozelená tuhá látka sa sušila v sušičke pri 40 °C cez noc, čím sa získal suchý psilocín (7) ako tmavozelená tuhá látka; výťažok: 20,7
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocín bol syntetizovaný.
Časť II: Vývoj transdermálnej náplasti s psilocínom a in vitro štúdia (POZOR: BUDETE VIDIEŤ ČERSTVÉ ĽUDSKÉ TELO, JEHO HROZNÉ
Potom rozpustím psilocín vo vlastnej zmesi akrylátového polyméru (v heptáne), potom roztok nalejem do uvoľňovacej linky a pomocou odlievacieho noža získam lepiacu vrstvu na 100 um. Po zaschnutí nanesiem podkladovú vrstvu a vyrazím náplasť s veľkosťou 1 cm^2. Táto náplasť sa použije na štúdiu in vitro.
Nasledujúca fotografia je snímka difúzneho prístroja (náplasť na koži s vodou tečúcou pod ňou).
Dúfam, že sa vám bude páčiť!
Toto sa prehlbuje, pretože psilocín je veľmi nestabilný. v nasledujúcej publikácii Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization (Objasnenie štruktúry a spektroskopická analýza chromofórov produkovaných oxidačnou dimerizáciou psilocínu) sa preberá táto problematika. Keď sa vytvorí dimér, je nedetekovateľný pomocou analýzy HPLC a ATR-FTIR, čo je zvláštne. Výskumné skupiny tak získavajú falošne pozitívne údaje o čistote psilocínu. Našiel som spôsob, ako stabilizovať psilocín v náplasti.
Každopádne, môžeme začať! Každý krok som urobil sám s pomocou môjho partnera, ktorý je chemický inžinier. Bolo to ešte v čase, keď som mal licenciu DEA podľa zoznamu1 a 3 nielen na výskum, ale aj na výrobu.
Časť I (syntéza psilocínu)
krok 1: syntéza 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetylu]-1H-indol-4-yl acetátu
1a. Štvorhrdlová banka s okrúhlym dnom s objemom 2000 ml bola vybavená horným miešadlom, regulátorom teploty J-Kem, 250 ml kvapkacím lievikom a gumovou prepážkou, cez ktorú bol zavedený pretlak suchého N2. Prepážka sa odstránila a banka sa rovnomerne naplnila 1H-indol-4-yl-acetátom (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 equiv)
a anhyd Et2O (700 ml). Banka sa znovu uzavrela septom a preplachovala sa N2. Suspenzia sa miešala 10 min a potom sa
ochladzovaná na 0 °C v ľadovom vodnom kúpeli počas 30 min.
1b. Do kvapkacieho lievika sa pridal roztok oxalylchloridu (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviv) v Et2O (60 ml). Roztok oxalylchloridu sa pridával po kvapkách rýchlosťou dostatočnou na udržanie teploty na úrovni 5 °C alebo nižšej, aby sa minimalizovala tvorba diméru a iných možných vedľajších produktov. Pri postupujúcom pridávaní sa vytvorila žltá suspenzia 10 a po dokončení pridávania sa zmes miešala 4 h.
1c. Po tomto čase sa pridal heptán (400 ml) a zmes sa miešala 30 min pri 0 °C. Získaná žltá tuhá látka sa rýchlo prefiltrovala a postupne prepláchla heptánom (2 × 300 ml), ktorý sa rýchlo použil v ďalšom kroku. . 2,0 M roztok dimetylamínu v THF (175 ml) sa pridával po kvapkách rýchlosťou dostatočnou na udržanie teploty pod 5 °C, aby sa minimalizovali vedľajšie reakcie. Po
(46 ml) v THF (100 ml) sa po kvapkách pridával pyridín a zmes sa dobre miešala 60 minút. Pridal sa heptán (600 ml) a obsah banky sa prefiltroval cez Büchnerov lievik. Prefiltrovaný zvyšok sa preniesol do banky s okrúhlym dnom a pridala sa deionizovaná H2O (1000 ml), miešalo sa 30 min a filtrovalo sa cez Büchnerov lievik. Biela pevná látka sa triturovala postupne 40 min v EtOAc (600 ml) a heptáne (400 ml). Suspenzia sa prefiltrovala cez Büchnerov lievik a pevná látka sa sušila v sušičke pri 40 °C cez noc, čím sa získal 6 ako svetložltá pevná látka; výťažok: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR potvrdila syntézu syntézy 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu. Túto zlúčeninu možno skladovať pri teplote 4C niekoľko mesiacov!
Krok 2: Syntéza psilocínu
Krok 2A: 2000 ml štvorhrdlová banka s okrúhlym dnom bola vybavená horným miešadlom, regulátorom teploty J-Kem
250 ml kvapkacím lievikom a gumovou prepážkou, cez ktorú bol zavedený pretlak suchého N2. Prepážka sa odstránila a
do banky sa postupne pridával 3-[2-(dimetylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetát (6; 31,5 g, 115 mmol) a 2-CH3-THF (1000
ml). Banka sa ponorila do ľadovej kúpele pri teplote 0 °C a roztok 2,3 M LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 ml, 322 mmol) sa pridal cez
250 ml kvapkacím lievikom. Kvapkový lievik sa prepláchol ďalším 2-CH3-THF (20 ml). Roztok LiAlH4 sa pridal po kvapkách
takou rýchlosťou, aby sa udržala teplota pod 20 °C. Po pridaní sa odstránil ľadový vodný kúpeľ a zmes sa miešala 30 min.
Svetložltý roztok sa zahrieval na reflux (80 °C) s ohrievacím plášťom a po 3 h sa sfarbil na slonovinovú farbu.
na stenách banky s okrúhlym dnom sa pozorovalo hromadenie žltých pevných látok
Krok 2C. Vykurovací plášť sa odstránil a banka sa nechala vychladnúť na 50 °C. Banka sa opäť
ochladená na 20 °C. Reakcia sa uhasila postupným pridaním 3 kvapiek 1 M aq NaOH a 3 kvapiek deionizovanej H2O. Zmes
sa zriedila THF (500 ml) a miešala 20 min. Zmes sa prefiltrovala cez Büchnerov lievik a filtrát sa uchovával pod N2.
Filtračný koláč sa rýchlo znovu premiešal s 200 ml [10 % roztoku (7 % amoniaku v MeOH) v CH2Cl2] a THF (500 ml). Filtráty
sa potom spojili a skoncentrovali, čím sa získala zelená tuhá látka. Pevná látka sa triturovala v pomere 1:1 EtOAc/heptán (50 ml), potom sa filtrovala cez
Büchnerovým lievikom. Tmavozelená tuhá látka sa sušila v sušičke pri 40 °C cez noc, čím sa získal suchý psilocín (7) ako tmavozelená tuhá látka; výťažok: 20,7
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocín bol syntetizovaný.
Časť II: Vývoj transdermálnej náplasti s psilocínom a in vitro štúdia (POZOR: BUDETE VIDIEŤ ČERSTVÉ ĽUDSKÉ TELO, JEHO HROZNÉ
Potom rozpustím psilocín vo vlastnej zmesi akrylátového polyméru (v heptáne), potom roztok nalejem do uvoľňovacej linky a pomocou odlievacieho noža získam lepiacu vrstvu na 100 um. Po zaschnutí nanesiem podkladovú vrstvu a vyrazím náplasť s veľkosťou 1 cm^2. Táto náplasť sa použije na štúdiu in vitro.
Nasledujúca fotografia je snímka difúzneho prístroja (náplasť na koži s vodou tečúcou pod ňou).
Dúfam, že sa vám bude páčiť!
