Dobře, lidi! Je čas podělit se s vámi o některé znalosti. Popíšu syntézu psilocinu, kterou jsem provedl, doplněnou fotografiemi. Vyrobený psilocin jsem použil a vyvinul jednoduchou lepicí náplast. Abychom otestovali prostupnost psilocinu náplastí, použili jsme difuzní přístroj, který jsem sestavil. Zahrnuje několik membrán, přičemž náplast o ploše 1 cm^2 se položí na kousek čerstvé lidské kůže o tloušťce 1 cm^2 a tloušťce 400 um (darovaná z chirurgického centra pro plastiku břicha). Pod kůží je stálý tok vody o pH 7,4 a tělesné teplotě. Difuzní přístroj je schopen shromáždit frakci o objemu 1 ml za hodinu, která je poté analyzována pomocí LC-MS. Množství psilocinu v 1ml lahvičce udává tok (mg/hod/cm^2). To určuje, kolik psilocinu projde za hodinu při velikosti náplasti cm^2.
To se prohlubuje, protože psilocin je velmi nestabilní. následující publikace Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization (Objasnění struktury a spektroskopická analýza chromoforů vzniklých oxidativní dimerizací psilocinu) se zabývá touto problematikou. Když se vytvoří dimer, je nedetekovatelný pomocí HPLC analýzy a ATR-FTIR, což je zvláštní. Výzkumné skupiny tak získávají falešně pozitivní údaje o čistotě psilocinu. Našel jsem způsob, jak psilocin v náplasti stabilizovat.
Každopádně můžeme začít! Každý krok jsem dělal sám s pomocí svého partnera, který je chemický inženýr. Bylo to v době, kdy jsem měl licenci DEA schedule1 a 3 nejen pro výzkum, ale i pro výrobu.
Část I (Syntéza psilocinu)
krok 1: syntéza 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu
1a. Čtyřhrdlá baňka s kulatým dnem o objemu 2000 ml byla vybavena horním míchadlem, regulátorem teploty J-Kem, 250ml kapací nálevkou a gumovou přepážkou, přes kterou byl zaveden přetlak suchéhoN2. Septum bylo odstraněno a baňka byla rovnoměrně naplněna 1H-indol-4-yl-acetátem (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 ekviv).
a bezvodým Et2O (700 ml). Baňka byla znovu uzavřena septem a propláchnuta N2. Suspenze byla míchána po dobu 10 min a poté se
ochlazena na 0 °C v ledové vodní lázni po dobu 30 min.
1b. Kapací nálevka byla naplněna roztokem oxalylchloridu (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviv) v Et2O (60 ml). Roztok oxalylchloridu byl přidáván po kapkách takovou rychlostí, aby se teplota udržovala na 5 °C nebo nižší, aby se minimalizovala tvorba dimeru a dalších možných vedlejších produktů. S postupujícím přídavkem se vytvořila žlutá suspenze 10 a po dokončení přídavku byla směs míchána po dobu 4 hodin.
1c. Po této době byl přidán heptan (400 ml) a směs se míchala 30 min při 0 °C. Získaná žlutá pevná látka byla rychle zfiltrována a postupně promyta heptanem (2 × 300 ml), který byl rychle použit v dalším kroku. . 2,0 M roztok dimetylaminu v THF (175 ml) byl přidáván po kapkách rychlostí dostatečnou k udržení teploty pod 5 °C, aby se minimalizovaly vedlejší reakce. Po
byl pyridin (46 ml) v THF (100 ml) přidáván po kapkách a směs byla dobře míchána po dobu 60 min. Byl přidán heptan (600 ml) a obsah baňky byl odsát přesBüchnerovu nálevku. Přefiltrovaný zbytek byl převeden do baňky s kulatým dnem a byla přidána deionizovaná H2O (1000 ml), mícháno 30 min a filtrováno přes Büchnerovu nálevku. Bělavá pevná látka byla trituována postupně po dobu 40 min v EtOAc (600 ml) a heptanu (400 ml). Suspenze byla filtrována přes Büchnerovu nálevku a pevná látka byla sušena v sušárně při 40 °C přes noc za vzniku 6 jako světle žluté pevné látky; výtěžek: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR potvrdila syntézu syntézy 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu. Tuto sloučeninu lze skladovat při 4C po dobu několika měsíců!
Krok 2: Syntéza psilocinu
Krok 2A: Čtyřhrdlá baňka s kulatým dnem o objemu 2000 ml byla vybavena horním míchadlem, regulátorem teploty J-Kem
250 ml kapací nálevkou a gumovou přepážkou, přes kterou byl zaveden přetlak suchého N2. Přepážka byla odstraněna a
baňka byla postupně naplněna 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetylo]-1H-indol-4-yl-acetátem (6; 31,5 g, 115 mmol) a 2-CH3-THF (1000 ml).
ml). Baňka byla ponořena do ledové lázně při teplotě 0 °C a byl přidán 2,3 M roztok LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 ml, 322 mmol).
250 ml kapací nálevkou. Kapací nálevka byla propláchnuta dalším 2-CH3-THF (20 ml). Roztok LiAlH4 byl přidán po kapkách
takovou rychlostí, aby byla udržována teplota pod 20 °C. Po přidání byla ledová vodní lázeň odstraněna a směs se míchala 30 min.
Světle žlutý roztok byl zahříván na reflux (80 °C) s ohřívacím pláštěm a po 3 h se zbarvil do barvy slonové kosti.
žluté pevné látky na stěnách baňky s kulatým dnem.
Krok 2C. Ohřívací plášť byl odstraněn a baňka se nechala vychladnout na 50 °C. Baňka byla opět
zchlazena na 20 °C. Reakce byla uhašena postupným přidáním 3 kapek aq 1 M NaOH a 3 kapek deionizované H2O. Směs
byla zředěna THF (500 ml) a míchána po dobu 20 min. Směs byla filtrována Büchnerovou nálevkou a filtrát byl uchováván pod N2.
Filtrační koláč byl rychle znovu promíchán s 200 ml [10% roztoku (7% amoniaku v MeOH) v CH2Cl2] a THF (500 ml). Filtráty
byly poté spojeny a zkoncentrovány za vzniku zelené pevné látky. Pevná látka byla triturována v poměru 1:1 EtOAc/heptan (50 ml) a poté filtrována přes filtr.
Büchnerovou nálevkou. Tmavě zelená pevná látka byla přes noc sušena v sušárně při 40 °C, čímž vznikl suchý psilocin (7) ve formě tmavě zelené pevné látky; výtěžek: 20,7 %.
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocin byl syntetizován.
Část II: Vývoj transdermální náplasti s psilocinem a studie in vitro (POZOR: BUDETE VIDĚT ČERSTVOU LIDSKOU TĚLESNOU HMOTU, JEJÍ HROZNÝ STAV).
Poté rozpustím psilocin do patentované směsi akrylátového polymeru (v heptanu), roztok pak odlévám do uvolňovací linky a pomocí odlévacího nože dosáhnu vrstvy lepidla o velikosti 100 um. Po zaschnutí nanesu podkladovou vrstvu a vyrazím záplatu o velikosti 1 cm^2. Tato náplast se použije pro studii in vitro.
Na následující fotografii je snímek difuzního aparátu (náplast na kůži, pod kterou teče voda).
Doufám, že se vám bude líbit!
To se prohlubuje, protože psilocin je velmi nestabilní. následující publikace Structure Elucidation and Spectroscopic Analysis of Chromophores Produced by Oxidative Psilocin Dimerization (Objasnění struktury a spektroskopická analýza chromoforů vzniklých oxidativní dimerizací psilocinu) se zabývá touto problematikou. Když se vytvoří dimer, je nedetekovatelný pomocí HPLC analýzy a ATR-FTIR, což je zvláštní. Výzkumné skupiny tak získávají falešně pozitivní údaje o čistotě psilocinu. Našel jsem způsob, jak psilocin v náplasti stabilizovat.
Každopádně můžeme začít! Každý krok jsem dělal sám s pomocí svého partnera, který je chemický inženýr. Bylo to v době, kdy jsem měl licenci DEA schedule1 a 3 nejen pro výzkum, ale i pro výrobu.
Část I (Syntéza psilocinu)
krok 1: syntéza 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu
1a. Čtyřhrdlá baňka s kulatým dnem o objemu 2000 ml byla vybavena horním míchadlem, regulátorem teploty J-Kem, 250ml kapací nálevkou a gumovou přepážkou, přes kterou byl zaveden přetlak suchéhoN2. Septum bylo odstraněno a baňka byla rovnoměrně naplněna 1H-indol-4-yl-acetátem (5; 50,1 g, 285 mmol, 1 ekviv).
a bezvodým Et2O (700 ml). Baňka byla znovu uzavřena septem a propláchnuta N2. Suspenze byla míchána po dobu 10 min a poté se
ochlazena na 0 °C v ledové vodní lázni po dobu 30 min.
1b. Kapací nálevka byla naplněna roztokem oxalylchloridu (37,1 ml, 428 mmol, 1,5 ekviv) v Et2O (60 ml). Roztok oxalylchloridu byl přidáván po kapkách takovou rychlostí, aby se teplota udržovala na 5 °C nebo nižší, aby se minimalizovala tvorba dimeru a dalších možných vedlejších produktů. S postupujícím přídavkem se vytvořila žlutá suspenze 10 a po dokončení přídavku byla směs míchána po dobu 4 hodin.
1c. Po této době byl přidán heptan (400 ml) a směs se míchala 30 min při 0 °C. Získaná žlutá pevná látka byla rychle zfiltrována a postupně promyta heptanem (2 × 300 ml), který byl rychle použit v dalším kroku. . 2,0 M roztok dimetylaminu v THF (175 ml) byl přidáván po kapkách rychlostí dostatečnou k udržení teploty pod 5 °C, aby se minimalizovaly vedlejší reakce. Po
byl pyridin (46 ml) v THF (100 ml) přidáván po kapkách a směs byla dobře míchána po dobu 60 min. Byl přidán heptan (600 ml) a obsah baňky byl odsát přesBüchnerovu nálevku. Přefiltrovaný zbytek byl převeden do baňky s kulatým dnem a byla přidána deionizovaná H2O (1000 ml), mícháno 30 min a filtrováno přes Büchnerovu nálevku. Bělavá pevná látka byla trituována postupně po dobu 40 min v EtOAc (600 ml) a heptanu (400 ml). Suspenze byla filtrována přes Büchnerovu nálevku a pevná látka byla sušena v sušárně při 40 °C přes noc za vzniku 6 jako světle žluté pevné látky; výtěžek: 66,1 g (81 %); mp 205-207 °C.
ATR-FTIR potvrdila syntézu syntézy 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetyl]-1H-indol-4-yl acetátu. Tuto sloučeninu lze skladovat při 4C po dobu několika měsíců!
Krok 2: Syntéza psilocinu
Krok 2A: Čtyřhrdlá baňka s kulatým dnem o objemu 2000 ml byla vybavena horním míchadlem, regulátorem teploty J-Kem
250 ml kapací nálevkou a gumovou přepážkou, přes kterou byl zaveden přetlak suchého N2. Přepážka byla odstraněna a
baňka byla postupně naplněna 3-[2-(dimethylamino)-2-oxoacetylo]-1H-indol-4-yl-acetátem (6; 31,5 g, 115 mmol) a 2-CH3-THF (1000 ml).
ml). Baňka byla ponořena do ledové lázně při teplotě 0 °C a byl přidán 2,3 M roztok LiAlH4 v 2-CH3-THF (140 ml, 322 mmol).
250 ml kapací nálevkou. Kapací nálevka byla propláchnuta dalším 2-CH3-THF (20 ml). Roztok LiAlH4 byl přidán po kapkách
takovou rychlostí, aby byla udržována teplota pod 20 °C. Po přidání byla ledová vodní lázeň odstraněna a směs se míchala 30 min.
Světle žlutý roztok byl zahříván na reflux (80 °C) s ohřívacím pláštěm a po 3 h se zbarvil do barvy slonové kosti.
žluté pevné látky na stěnách baňky s kulatým dnem.
Krok 2C. Ohřívací plášť byl odstraněn a baňka se nechala vychladnout na 50 °C. Baňka byla opět
zchlazena na 20 °C. Reakce byla uhašena postupným přidáním 3 kapek aq 1 M NaOH a 3 kapek deionizované H2O. Směs
byla zředěna THF (500 ml) a míchána po dobu 20 min. Směs byla filtrována Büchnerovou nálevkou a filtrát byl uchováván pod N2.
Filtrační koláč byl rychle znovu promíchán s 200 ml [10% roztoku (7% amoniaku v MeOH) v CH2Cl2] a THF (500 ml). Filtráty
byly poté spojeny a zkoncentrovány za vzniku zelené pevné látky. Pevná látka byla triturována v poměru 1:1 EtOAc/heptan (50 ml) a poté filtrována přes filtr.
Büchnerovou nálevkou. Tmavě zelená pevná látka byla přes noc sušena v sušárně při 40 °C, čímž vznikl suchý psilocin (7) ve formě tmavě zelené pevné látky; výtěžek: 20,7 %.
g (91 %); mp 167-169 °C.
Psilocin byl syntetizován.
Část II: Vývoj transdermální náplasti s psilocinem a studie in vitro (POZOR: BUDETE VIDĚT ČERSTVOU LIDSKOU TĚLESNOU HMOTU, JEJÍ HROZNÝ STAV).
Poté rozpustím psilocin do patentované směsi akrylátového polymeru (v heptanu), roztok pak odlévám do uvolňovací linky a pomocí odlévacího nože dosáhnu vrstvy lepidla o velikosti 100 um. Po zaschnutí nanesu podkladovou vrstvu a vyrazím záplatu o velikosti 1 cm^2. Tato náplast se použije pro studii in vitro.
Na následující fotografii je snímek difuzního aparátu (náplast na kůži, pod kterou teče voda).
Doufám, že se vám bude líbit!
